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以双链dna为模板的体外诱变:用dpnⅰ选择突变体实验-利来app官方下载

实验材料 带 hsdr17 基因型的感受态大肠杆菌菌株试剂、试剂盒 atp含有四种 dntf 的混合溶液诱变缓沖液naohnaacte噬菌体 t4dna 连接酶噬菌体 t4 多核苷酸激酶dpni 限制性内切酶热稳定 dna 聚合酶琼脂糖凝胶寡核苷酸引物质粒 dna仪器、耗材 带障蔽的自动微量移液器用吸头微型离心管微量滴定板可调式移液器能设定所需扩墻参数的热循环仪实验步骤 材料缓冲液和溶液贮存液,缓冲液和试剂的成分请参阅附录 1。将贮存液稀释到合适的浓度。atp(10 mmol/l)含有四种 dntf 的混合溶液,每一种 dntp 浓度为 5 mmol/l10x 长 pcr 缓冲液(用于混合的 dna 聚合酶)500 mmol/l tris-cl(室温下 ph9.0)160 mmol/l 硫酸按25 mmol/l mgcl21.5 mg/ml bsa由厂商提供的缓冲液和热稳定 dna 聚合酶缓冲液可替代上述缓冲液。或10x 诱变缓......

以双链 dna 为模板的体外诱变:用 dpnⅰ选择突变体实验

本方案和方案 4 是以变性质粒 dna 为模板,使用两条寡核苷酸和高保真聚合酶引导 dna 合成。本方案中,经多轮热循环全长双链质粒 dna 将以线性形式扩增,产生一种 dna 双链上带交错缺口的突变质粒(hemsleyetal.1989)。本实验来源于分子克隆实验指南(第三版)下册,作者:〔美〕j

以双链 dna 为模板的体外诱变:用 dpnⅰ选择

            实验材料 带 hsdr17 基因型的感受态大肠杆菌菌株 试剂、试剂盒 at

目前应用的两种快速序列测定技术是sanger等(1977)提出的酶法及maxam和gilbert(1977)提出的化学降解法。虽然其原理大相径庭,但这两种方法都是同样生成互相独立的若干组带放射性标记的寡核苷酸,每组寡核苷酸都有固定的起点,但却随机终止于特定的一种或者多种残基上。由于dna上的每一个碱

本方法中,两条寡核苷酸引物杂交到变性重组质粒 dna 双链的同一条链上。一条引物(诱变引物)携带一个拟引进靶 dna 序列的突变,第二条引物携带一个能破坏质粒单一限制酶位点的突变。本实验来源于分子克隆实验指南(第三版)下册,作者:〔美〕j. 萨姆布鲁克 d.w. 拉塞尔。实验材料带 muts 表型(

一滴残留在裙子上的精液使得美国总统bill clinton不得不坦承他与白宫实习生有不正当的关系。因为他知道现在的生物科技就连一个精子也能被用来做为证据。这种将极微量的生物标本化为可供鉴定的现代技术正是pcr(polymerase chain reaction)--聚合

一、杂交通过碱基对之间非共价键(主要是氢键)的形成即出现稳定的双链区,这是核酸分子杂交的基础。杂交分子的形成并不要求两条单链的碱基顺序完全互补,所以不同来源的核酸单链只要彼此之间有一定程度的互补顺序(即某种程度的同源性)就可以形成杂交双链。分子杂交可在dna与dna、rna与rna或rna与dna的

一、概述  前面已经介绍了核酸分子单链之间有互补的碱基顺序,通过碱基对之间非共价键(主要是氢键)的形成即出现稳定的双链区,这是核酸分子杂交的基础。杂交分子的形成并不要求两条单链的碱基顺序完全互补,所以不同来源的核酸单链只要彼此之间有一定程度的互补顺序(即某种程度的同源性)就可以形成杂交双链。分子杂交

一、概述  前面已经介绍了核酸分子单链之间有互补的碱基顺序,通过碱基对之间非共价键(主要是氢键)的形成即出现稳定的双链区,这是核酸分子杂交的基础。杂交分子的形成并不要求两条单链的碱基顺序完全互补,所以不同来源的核酸单链只要彼此之间有一定程度的互补顺序(即某种程度的同源性)就可以形成杂交双链。分子杂交

本章描述了改进融合蛋白在 m13 噬菌体颗粒表面展示水平的一个方法。向 m13 衣壳锚定蛋白引入突变后,蛋白质展示水平约能增加两个数量级。本实验来源「现代蛋白质工程实验指南」〔德〕k.m.阿恩特、k.m.米勒编著。实验材料羧苄青霉素氯霉素大肠杆菌 cj236试剂、试剂盒生理磷酸缓冲液超纯甘油pbs-

荧光定量pcr实验指南一、基本步骤:1、目的基因(dna和mrna)的查找和比对;2、引物、探针的设计;3、引物探针的合成;4、反应体系的配制;5、反应条件的设定;6、反应体系和条件的优化;7、荧光曲线和数据分析;8、标准品的制备;二、技术关键:1、 目的基因(dna和mrna)的查找和比

一、rna 制备   模板mrna 的质量直接影响到cdna 合成的效率。由于mrna 分子的结构特点,容易受rna 酶的攻击反应而降解,加上rna 酶极为稳定且广泛存在,因而在提取过程中要严格防止rna 酶的污染,并设法抑制其活性,这是本实验成败的关键。所有的组织中均存在rna 酶,人

pcr反应的准备pcr反应体系10×扩增缓冲液10μl4种dntp混合物(终浓度)各100~250μmol/l引物(终浓度)各5~20μmol/l模板dna0.1~2μgtaq dna聚合酶5~10 umg2 (终浓度)1~3mmol/l补加双蒸水100 μl其中dntp、引物、模板dna、taq

核酸分子杂交技术由于核酸分子杂交的高度特异性及检测方法的灵敏性,它已成为分子生物学中最常用的基本技术,被广泛应用于基因克隆的筛选,酶切图谱的制作,基因序列的定量和定性分析及基因突变的检测等。其基本原理是具有一定同源性的原条核酸单链在一定的条件下(适宜的温室度及离子强度等)可按碱基互补原成双链。杂交的

 定义  聚合酶链式反应简称pcr(英文全称:polymerase chain reaction),  聚合酶链式反应具体内容点击: 聚合酶链式反应,简称pcr。聚合酶链式反应,其英文polymease chain reaction(pcr)是体外酶促合成特异

内容:一、遗传标记 二、dna分子标记 三、染色体原位杂交 四、dna分子标记的应用 长期以来,植物育种中选择都是基于植株的表型性状进行的,当性状的遗传基础较为简单或即使较为复杂但表现加性基因遗传效应时,表型选择是有效的。但水稻的许多重要农艺性状为数量性状,如

分子杂交技术    互补的核苷酸序列通过walson-crick 碱基配对形成稳定的杂合双链分子dna 分子的过程称为杂交。杂交过程是高度特异性的,可以根据所使用的探针已知序列进行特异性的靶序列检测。杂交的双方是所使用探针和要检测的核酸。该检测对象可以是克隆化的基因组dna,也可以是细胞总dn

实验方法原理噬菌体展示技术是将外源基因与噬菌体的表面蛋白基因融合,在融合了外源基因的噬菌体颗粒的表面就会表达相应的外源蛋白,即外源基因编码的蛋白被展示在噬菌体颗粒的表面。实验材料载体trna抗体寡核苷酸试剂、试剂盒抗生素储存液bcip葡萄糖储存液x-gal磁珠洗液蛋白酶抑制剂rnase 抑制剂ten

利用核苷酸交换和剪切技术进行dna碎裂和定向进化             实验材料 t4 dna 连接

逐步地从靶 dna 的一端或另一端删除多个寡核苷酸的嵌套式缺失突变方法被用来确定功能性顺式调控元件的边界,早先曾作为指导 dna 测序的模板。该方法依赖于核酸酶,这些核酸酶均以可预测的方式消化 dna, 其中外切核酸酶 hi 是目前最好的。本实验来源于分子克隆实验指南(第三版)下册,作者:〔美〕j.

1.      引物是如何合成的?目前引物合成基本采用固相亚磷酰胺三酯法。dna合成仪有很多种, 主要都是由abi/pe 公司生产,而bioneer自行研制的专利384并行高通量dna合成仪,可实现99%的高合成率。无论采用什么机器合成,合成的原理都相同,主要差别在于合

  八十年代以来由人类免疫缺陷病毒(hiv)感染而引起的艾滋病(aids)因其严重的危害性而受到人们高度重视,力争早期诊断和寻求有效治疗是防止其广泛传播的关键所在.聚合酶链反应(pcr)具有敏感、特异和快速的特点,是检测病毒、评价病情进展和探讨发病机理的有效工具.一、hiv的基因结构  hiv的基因

dna序列测定技术序列测定的技术和策略sanger双脱氧链终止法maxam-gilbert dna化学降解法测序策略  目前应用的两种快速序列测定技术是sanger等(1977)提出的酶法及maxam和gilbert(1977)提出的化学降解法。虽然其原理大相径庭,但这两种方法都是同样生成互相独立的

            实验材料 λ噬菌体臂 大肠杆菌菌株 用于λ噬菌体的包装抽提物 试剂、试剂

pcr技术可用于:(1)检验感染性疾病是否处于隐性或亚临床状态;(2)有效检测癌基因的突变,准确检测癌基因的表达量;(3)临床应用于检测地中海贫血的基因突变。实验方法原理基本原理类似于dna的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。pcr由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成

  1. 引物是如何合成的?  目前引物合成基本采用固相亚磷酰胺三酯法。dna合成仪有很多种, 主要都是由abi/pe 公司生产,而bioneer自行研制的专利384并行高通量dna合成仪,可实现99%的高合成率。无论采用什么机器合成,合成的原理都相同,主要差别在于合成产率的高低,试剂消耗量的不同和

摘要:综述了rapd技术的一些理论性问题,包括rapd与其它分子标记技术相比的优点,影响结果重复性的因素,显性标记产生的原因,条带取舍的标准等。提出在实验中解决这些问题的一些方法:严格控制反应条件,采用单倍体和单剂量标记,系统学研究中要结合其它方法进行分析,定位基因时要选用合适的群体等。 

概念   引物,是一小段单链dna或rna,作为dna复制的起始点,在核酸合成反应时,作为每个多核苷酸链进行延伸的出发点而起作用的多核苷酸链,在引物的3′-oh上,核苷酸以二酯链形式进行合成,因此引物的3′-oh,必须是游离的。类型  存在有自然中生物的dna复制引物(rna引物)和聚合酶链式反应(

pcr引物设计及软件使用技巧张新宇,朱有康,高燕宁(中国协和医科大学中国医学科学院肿瘤研究所,北京100021)摘要:本文旨在介绍使用软件设计pcr引物的技巧。在pcr引物设计原则的基础上,详细介绍了两种常用引物设计软件的基本使用方法,并对其各自的优缺点进行了比较。一般性引物自动搜索可采用“prem

第一节 概述  聚合酶链反应或多聚酶链反应(polymerase chain reaction, pcr),又称无细胞克隆技术(“free bacteria”cloning technique),是一种对特定的dna片段在体外进行快速扩增的新方法。该方法一改传统分子克隆技术的模式,不通过活细胞,操作

常见问题pcr产物的电泳检测时间一般为48h以内,有些最好于当日电泳检测,大于48h后带型不规则甚至消失。假阴性,不出现扩增条带。pcr反应的关键环节有①模板核酸的制备,②引物的质量与特异性,③酶的质量及, ④pcr循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。模板:①模板中含有杂蛋白质,②模板中