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stemcellreports:猪体细胞克隆研究获进展-利来app官方下载

近日,中国科学院广州生物医药与健康研究院赖良学课题组的最新研究成果,以xist derepression in active x chromosome hinders pig somatic cell nuclear transfer为题,在线发表在stem cell reports(《干细胞报告》)上。该研究首次探讨了x染色体上长链非编码rna xist和组蛋白h3k9me对猪体细胞克隆胚胎发育的影响,并对其在克隆胚胎中表达水平加以干预,大幅提高猪的克隆效率。 自克隆羊“多莉”产生,克隆技术历经几十年的发展,但包括猪在内的大动物克隆效率仍然十分低下。赖良学研究组在多年的克隆猪研究中发现,猪克隆胚胎移植到代孕母体后,大部分胎儿都会发生退化,其机制目前尚不清楚。课题组阮德功博士等从分析正常发育的胎儿和退化吸收的胎儿的表达谱入手,发现猪的克隆胚胎的基因表达谱与小鼠明显不同,小鼠克隆胚胎基因下调主要出现在x染色体,而猪的克隆胚胎......

3.2 免 疫 b 细胞的制备血清效价有意义(>1 : 1000)的免疫后动物可以提供抗原反应性b 细胞用于融合。这些细胞可以从脾脏或淋巴结中获得。动物用吸人co2 处死,在无菌操作下取组织,放 在 4°c无血清培养基中,最多可放lh 。用慑子或针头轻轻打开组织脾脏或淋巴结的外包膜获得

实验方法原理细胞被制成分散的悬液后,以低密度(2~5 个细胞/cm2)被接种到底物上,贴壁并能存活生长形成细胞小群(克隆)的细胞百分数值称接种存活率,用以表示细胞群的活力。由于检测接种存活率时是借观察克隆(通常为16~50 个细胞)形成情况,又因每个克隆都来自一个细胞,因此也称克隆形成率。细胞接种存

平板细胞克隆形成试验             实验方法原理 克隆形成试验是测定细胞增殖能力的有效方法之一,贴壁后的细胞不一

 检测抗体的方法应根据抗原的性质、抗体的类型不同,选择不同的筛选方法,一般以快速、简便、特异、敏感的方法为原则。  常用的方法有:  1. elisa用于可溶性抗原蛋白质、细胞和病毒等mcab的检测。  2. ria用于可溶性抗原、细胞mcab的检测。  3. facs荧光激活细胞分类仪用于检查细胞

 (二)细胞融合  1.细胞融合前准备  (1)骨髓瘤细胞系的选择:骨髓瘤细胞应和免疫动物属于同一品系,这样杂交融合率高,也便于接种杂交瘤在同一品系小鼠腹腔内产生大量mcab。常用的骨髓瘤细胞系见表2-4。表2-4用于融合试验的主要骨髓瘤细胞系名 称来 源耐 受 药 物ig链h lp3/x63-ag

            实验方法原理 克隆形成试验是测定细胞增殖能力的有效方法之一,贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆,而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞。细胞克隆形成率表示接种细胞后贴壁的细

摘要: 细胞计数这是细胞培养中常用的基本技术之一,所用材料为细胞计数板、巴氏吸管和显微镜,步骤如下. 一、细胞计数 这是细胞培养中常用的基本技术之一.所用材料为细胞计数板.巴氏吸管和显微镜.步骤如下. 取清洁计数板和专用盖玻片,用丝绸布轻轻擦干. 取

实验方法原理1975年,kohler和milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合,形成的杂交细胞既可产生抗体,又可无限增殖,从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元,也为临床疾病的诊、防、治提供了新的工具。 制备单

            实验方法原理 1975年,kohler和milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合,形成的杂交细胞既可产生抗体,又可无限增殖,从而创立了单克隆抗体杂交瘤

淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术             实验方法原理 1975年,kohler和milstein发现将小鼠骨

实验方法原理克隆形成试验是测定细胞增殖能力的有效方法之一,贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆,而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞。细胞克隆形成率表示接种细胞后贴壁的细胞成活并形成克隆的数量,可以反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。实验材料细胞样品试剂、试剂盒胰蛋白酶胎牛血清dme

1975年,kohler和milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合,形成的杂交细胞既可产生抗体,又可无限增殖,从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元,也为临床疾病的诊、防、治提供了新的工具。  制备单克隆抗体包括动物免疫

  近日,来自澳大利亚the walter and eliza hall 研究所的jane e. visvader教授团队开发了一种快速、高通量单细胞分辨率3d成像技术(large-scale single-cell resolution 3d imaging, lsr-3d)操作方法,联合多颜色谱

 骨髓瘤细胞的培养可用一般的培养液,如rpmi1640,dmem培养基。小牛血清的浓度一般在10%~20%,细胞浓度以104~5×105/ml为宜,最大浓度不得超过106/ml。当细胞处于对数生长的中期时,可按1:3~1:10的比例传代。每3~5天传代一次。细胞在传代过程中,部分细胞可能有返祖现象,

融合后的细胞在孔里生长时,一般并不是一个单纯的克隆(一般是两个或者多个克隆,就算肉眼看到的是形成一个完整的克隆,但事实上可能是由两个或者多个原始的杂交瘤形成的),如果直接将其扩大培养将会产生两个问题:一是如果有两个或两个以上的克隆或一个克隆实际上是由两个克隆长在一起形成的,并且都分泌抗体,那么就有可

下面为美国标准细胞库或细胞银行(atcc)入库细胞的基本要求:   (1)培养简历 组织来源日期、物种、组织来源、性别、年龄、供体正常或异常健康状态,细胞已传代数等。   (2)冻存液 培养基和保护剂名称。 &

2.  hat选择杂交瘤 一般在融合24 小时后,加hat选择培养液。ht和hat均有商品化试剂50×贮存,用时1 ml加入50 ml20 %小牛血清完全培养液中。 因为在培养板内已加入饲养细胞、融合后的细胞,200 μl/孔。所以在加选择培养液时应加3倍量的hat。我

  一、克隆的早期研讨   克隆一词是英文单词clone的音译,作为名词,c1one通常被意译为无性繁衍系。同一克隆内一切成员的遗传构成是完整相同的,例外仅见于有突变发作时。自然界早已存在自然植物、动物和微生物的克隆,例如:同卵双胞胎实践上就是一种克隆。但是,自然的哺乳动物克隆的发作率极低,成员数

  一、克隆的早期研讨   克隆一词是英文单词clone的音译,作为名词,c1one通常被意译为无性繁衍系。同一克隆内一切成员的遗传构成是完整相同的,例外仅见于有突变发作时。自然界早已存在自然植物、动物和微生物的克隆,例如:同卵双胞胎实践上就是一种克隆。但是,自然的哺乳动物克隆的发作率极低,成员数

1975年,kohler和milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合,形成的杂交细胞既可产生抗体,又可无限增殖,从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元,也为临床疾病的诊、防、治提供了新的工具。  制备单克隆抗体包括动物免疫

原理:细胞接种存活率只表示接种细胞后贴壁的细胞数,但贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆。而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞。克隆形成率反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。由于细胞生物学性状不同,细胞克隆形成率差别也很大,一般初代培养细胞克隆形成率弱,传代细胞系强;二倍体细胞克隆形

原理:细胞接种存活率只表示接种细胞后贴壁的细胞数,但贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆。而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞。克隆形成率反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。由于细胞生物学性状不同,细胞克隆形成率差别也很大,一般初代培养细胞克隆形成率弱,传代细胞系强;二倍体细胞克隆形

原理:细胞接种存活率只表示接种细胞后贴壁的细胞数,但贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆。而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞。克隆形成率反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。由于细胞生物学性状不同,细胞克隆形成率差别也很大,一般初代培养细胞克隆形成率弱,传代细胞系强;二倍体细胞克隆形

  自天然耐受现象的发现,克隆选择学说的提出为免疫生物学的发展奠定了理论基础,使现代免疫学的发展方向发生了重大变化。使免疫学从抗感染免疫的概念中解脱出来,进而发展为生物机体对“自己”和“非己”的识别,藉以维持机体稳定性的生物学概念。这一发展时期自60年代迄今发现了胸腺的免疫功能,确认了淋巴

一、克隆的早期研究    克隆一词是英文单词clone的音译,作为名词,c1one通常被意译为无性繁殖系。同一克隆内所有成员的遗传构成是完全相同的,例外仅见于有突变发生时。自然界早已存在天然植物、动物和微生物的克隆,例如:同卵双胞胎实际上就是一种克隆。然而,天然的哺乳动物克隆

概念:细胞克隆形成率即细胞接种存活率,表示接种细胞后贴壁的细胞成活并形成克隆的数量。贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆,而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞。克隆形成率反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。基本步骤:1、取对数生长期的各组细胞,分别用0.25%胰蛋白酶消化并吹打成单个

(4)融合   ①将骨髓瘤细胞与脾细胞按1:10或1:5的比例混合在一起,在50ml离心管中用无血清不完全培养液洗1次,离心,1200rpm,8min;弃上清,用吸管吸净残留液体,以免影响聚乙二醇(peg)浓度。轻轻弹击离心管底,使细胞沉淀略松动。   ②90s内加入37℃预温的

 杂交瘤克隆化一般是指将抗体阳性孔进行克隆化。因为经过hat筛选后的杂交瘤克隆不能保证一个孔内只有一个克隆。在实际工作中,可能会有数个甚至更多的克隆,可能包括抗体分泌细胞、抗体非分泌细胞、所需要的抗体(特异性抗体)分泌细胞和其它无关抗体的分泌细胞。要想将这些细胞彼此分开就需要克隆化。克隆化

  自体细胞克隆技术问世以来,克隆胚胎发育成个体的效率一直很低。以小鼠为例,50-70%的核移植重构胚胎在体外能发育成囊胚,但是,将这些囊胚移入假孕小鼠子宫内,只有3%左右的囊胚能发育成克隆动物。那么,为什么大部分克隆囊胚不能发育成个体呢?一种假说认为,克隆囊胚滋养外胚层存在的重编程异

2. 克隆形成实验细胞的克隆形成实验被广泛应用于癌症的临床和机理研究中,人们以此来评价细胞群体在体外的功能状况。其中一些重要的研究领域就包括了细胞毒性评估、细胞转化研究以及预测肿瘤细胞对各种化学治疗试剂的反应。过去,克隆计数实验是在半固体的琼脂糖双层系统上进行的,需要在显微镜下一个一个地数

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